
包涵體蛋白復性步驟如下:
1. 前處理:將包涵體蛋白還原和解離,利用離子交換層析或凝膠過濾等方法進行初步純化。
2. 緩沖液選擇:選擇適合的緩沖液,常用的有一些常規的緩沖液,如Tris-HCl、MES、HEPES等,也可以根據蛋白質特性選擇不同的緩沖液。
3. 蛋白復性:將蛋白溶解在適當的緩沖液中,加入復性劑和輔助復性劑,例如,常用的復性劑有尿素、硫酸銨等,輔助復性劑有某些胺基酸、氨基糖等。
4. 氧化還原:包涵體蛋白復性后,常會存在氧化還原不平衡的問題,可以添加一些還原劑和氧化劑,例如DTT、GSH等還原劑,H2O2、CuSO4等氧化劑,以促進蛋白的氧化還原平衡。
5. 貯存:最后將復性后的蛋白液進行適當的處理和貯存,例如凍干或冷凍保存等,以保證蛋白的穩定性和長期保存質量。